بررسی میزان ترشح خارج سلولی پپتید ضد سرطان vegf۱۱۱b در سلول های انسانی hek-۲۹۳

سابقه و هدف: vegf111b یک ایزوفرم جدید از فاکتورهای رشد اندوتلیال عروقی (vegf) است که اخیرا به­ عنوان یک داروی ضد سرطان مطرح شده است. هدف مطالعه حاضر بررسی میزان ترشح این پروتئین از دیواره سلول­ های hek293 به­ منظور تولید تجاری این فاکتور نوترکیب است. مواد و روش ها: توالی vegf111b توسط نرم­افزار oligo و اطلاعات ژن بانک ncbi طراحی و داخل وکتور pbud.ce4.1کلون شد. وکتور نوترکیب pbud.vegf111b با استفاده از کیت لیپوفکتامین به داخل سلول­ های hek293 ترانسفکت شد. تولید vegf111b 48 ساعت بعد از ترانسفکشن در عصاره لیز سلولی توسط وسترن بلاتینگ و آنتی ­بادیhuman anti-vegf  بررسی شد. میزان ترشح vegf111b در عصاره لیز سلولی و محیط کشت سلولی به روش elisa اندازه گیری گردید. نتایج: کلونیتگ صحیح قطعهvegf111b  در وکتور pbud.ce4.1 توسط هضم آنزیمی و ژل الکتروفورز تائید شد. مشاهده باند شارپ 12 کیلودالتن در نتایج وسترن بلات عصاره لیز سلولی نشان­گر تولید پپتید نوترکیب vegf111b در سلول­ های hek293 بود. نتایج الایزا در جذب نوری 450 نانومتر برای  vegf111bدر محیط کشت سلولی و عصاره لیز سلولی به­ ترتیب برابر با 2/81±19/20 pg/ml و  pg/ml7/42± 32/87 بود. و در نمونه ­های کنترل منفی بیان vegf-111b مشاهده نشد. نتیجه گیری: یافته های این مطالعه نشان­گر قابلیت بالای انتقال و ترشح vegf111b از دیواره سلول­ های hek293 به محیط کشت سلولی بدون شکستگی و هضم پروتئولیتیکی است. به ­نظر می­ رسد تولید تجاری این پپتید دارویی و تخلیص از محیط کشت سلولی hek293 با بازدهی بالا امکان­ پذیر باشد.